技術(shù)文章
Technical articles
北京瀚時(shí)天暉分析儀器有限公司--專業(yè)研制生產(chǎn)銷售:
原子吸收光譜儀(CAAM-2001系列)、金屬套玻璃霧化器(WNA-系列)、氫化物發(fā)生器(WHG
氫化物發(fā)生原子吸收法測定血液頭發(fā)中痕量硒
在硒的生物化學(xué)作用被逐漸認(rèn)識的今天,要求提供的分析數(shù)據(jù).由于經(jīng)典的熒光光度法測定硒,條件比較苛刻,本文采用氫化物發(fā)生原子吸收法測定了人體、全血頭發(fā)樣品中硒的含量。在確定了儀器的*工作條件的基礎(chǔ)上,著重研究了測定全血,頭發(fā)樣品中硒的前處理方法及干擾試驗(yàn).本法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.5%,標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在95.7~102%之間,適用于開展流行病學(xué)調(diào)查和臨床分析的研究.
實(shí)驗(yàn)部分
一 儀器及工作條件
原子吸收光譜儀
氫化物發(fā)生器(WHG
金屬套玻璃霧化器(WNA-1型)
硒空心陰極燈
電熱石英管
波長196.0nm,燈電流5mA,狹縫1.3nm,空氣流量
二 試劑
硒(IV)標(biāo)準(zhǔn)貯備液:1000ug·ml-1,由高純硒粉配置.硒中間標(biāo)準(zhǔn)溶液5ug·ml-1.
硼氫化鉀:1.5%溶液中含有0.1%的氫氧化鈉,用時(shí)現(xiàn)配.
亞沸蒸餾水
三 試樣處理
準(zhǔn)確取0.20ml血液試樣或
于試樣處理的同時(shí)制備試劑空白.
四 校準(zhǔn)曲線的繪制
校準(zhǔn)曲線
用微量定量取樣器吸取硒中間表準(zhǔn)溶液,0,10,30,50和70ul分別放入50ml量瓶中,用HCl(30%)溶液稀釋到刻度,獲得濃度分別為0,1.0,3.0,5.0和7.0ng·ml 硒的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液.
標(biāo)準(zhǔn)加入法曲線
移取10ml試樣+10mlHCl(30%):10ml樣液+10ml 2ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 10ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 14ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液,制成均含HCL(30%)溶液的硒標(biāo)準(zhǔn)加入法系列溶液.
結(jié)果與討論
一 試樣前處理方法的考察
試樣的前處理是至關(guān)重要的.目前測定硒的前處理方法普遍采用濕法消化,常用的分解裝置有高型燒杯,三角錐瓶,高壓分解坩鍋和配有回流冷凝器的凱氏燒杯.由于前兩種裝置分解式樣時(shí),使用的酸量較大,硒易揮發(fā)損失,而且這些方法得消化液均需要轉(zhuǎn)移定容,易引起較大的誤差.本法采用刻度石英試管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化還原體系,于160ºC恒溫沙浴中消化血液頭發(fā)試樣.由于石英試管上端能起到空氣的冷凝回流作用,因而試劑不易揮發(fā),試樣消化*.與配有冷凝管的燒瓶消化法比較,具有操作簡單,試劑和式樣用量少,減少轉(zhuǎn)譯的誤差等優(yōu)點(diǎn).本法與水冷凝管的凱氏燒瓶消化法比較的結(jié)果見表1.
表1 分解方法的比較
統(tǒng)計(jì)參數(shù)* | 本法 | 水冷凝管燒瓶法 | ||
全血 (ng·ml-1 ) | 頭發(fā) (ng·g-1 ) | 全血 (ng·ml-1 ) | 頭發(fā) (ng·g-1 ) | |
X+SD | 144.5+6.9 | 66.5+13.0 | 145.0+7.1 | 664.8+14.4 |
N | 50 | 50 | 50 | 50 |
RSD% | 4.8 | 2.0 | 4.9 | 2.2 |
* X: 硒的平均值 n: 測定次數(shù) SD: 標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD:相對標(biāo)準(zhǔn)偏差
二 常見共存例子的干擾試驗(yàn)
我們調(diào)查了存在于血液,頭發(fā)中的25種共存例子對痕量硒測定的干擾試驗(yàn),結(jié)果表明,下述離子(ug·ml-1)不干擾5ng·ml-1硒的測定:Ca(700), Na 、Fe3+(500), Mg、K(200), Cu、Zn(5),Ni、Mn、Al(1), Cr6+、Co(0.2), Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ (0.1),Si、Ba(0.5),Pb(0.06),Cd(0.05)以及NO3-、ClO4-、H2O2(
銻(Ⅲ)0.05 ug·ml-1不干擾,含量≥0.1 ug·ml-1有負(fù)干擾,但血液頭發(fā)中銻的含量一般都低于此值,再者經(jīng)過了相對的稀釋,它不會給本法測定硒帶來影響.當(dāng)HNO3、HClO4、H2O2的濃度小于
時(shí)也不干擾測定.原因是鹽酸介質(zhì)保持了較佳濃度,可是試樣中的Fe、Cu和Ni等重金屬元素形成絡(luò)合物避免其干擾(1) ,這些與文獻(xiàn)(3) ,報(bào)道是一致的.另外還采用低濃度硒的校準(zhǔn)曲線,使試樣中基體元素的濃度得到相對稀釋(100倍以上),因而更有效地消除血液,頭發(fā)試樣中基體元素對測定硒的干擾.
三 校準(zhǔn)曲線法與標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果比較
在擬定的*條件下, 準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法(圖1),對試樣進(jìn)行了測試.實(shí)驗(yàn)表明,盡管血液,頭發(fā)試樣中含有較復(fù)雜的基體元素,但用上述兩種校準(zhǔn)曲線所求得硒的含量是一只的.
從圖1可以看出,三種校準(zhǔn)曲線的斜率基本相同,回歸分析后,相對系數(shù)均在0.9998以內(nèi).這也證明, 血液,頭發(fā)中的基體元素對硒的測定均無影響.
四 本法的回收率及精密度
在血液,頭發(fā)試樣中分別添加硒標(biāo)準(zhǔn),按試樣處理步驟處理后進(jìn)行測定,其回收結(jié)果見表2.五個(gè)平行樣品的測定,方法的精密度在1.2~4.8%以內(nèi).
經(jīng)過分析商業(yè)部食品檢測科學(xué)研究所提供的一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW08551)豬肝中的硒含量,標(biāo)準(zhǔn)值為0.94+0.05 ug·g-1 ,本法測定值為0.93+0.04 ug·g-1 ,準(zhǔn)確度是令人滿意的.
表 2 硒的回收率
樣品 | 原含Se量(ppb) | 加入Se量(ppb) | 測得Se量(ppb) | 回收率(%) |
空白 | - | 100 | 100 | 100 |
血液A | 144.4 | 100 200 | 241.3 347.8 | 96.9 102 |
血液B | 246.0 | 200 300 | 442.8 544.9 | 98.4 99.6 |
頭發(fā)C | 356.6 | 100 200 | 457.5 548.0 | 101 95.7 |
頭發(fā)D | 665.1 | 200 300 | 864.6 95902 | 99.8 98.0 |
五 應(yīng)用
用本法測定人體全血(177例)頭發(fā)(327例)中硒的含量,其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道值相近(4~11) .結(jié)果見表3.
表 3 人體全血,頭發(fā)硒平均水平
樣品 | 分析例數(shù) | 范圍(ppb) | 平均值(ppb) | 文獻(xiàn)值(ppb) |
血液 | 177 | 41.3~483.9 | 173.6 | 170(4) 125(5) 144(6) 171(7) 150(8) |
頭發(fā) | 327 | 226.3~1590.0 | 722.0 | 670(8) 740(10) 930(11) |
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