石墨爐原子吸收法測(cè)定全血中鉛的探討

    鉛（Pb），是多系統(tǒng)、多親和性的重金屬性的毒物，主要試嗜胎盤(pán)和嗜神經(jīng)性毒物，鉛在體內(nèi)任何痕量的存在即會(huì)造成傷害，如達(dá)到一定濃度，還會(huì)對(duì)兒童大腦造成不可逆轉(zhuǎn)的損害。血鉛值反映近期鉛的攝入量，常作為體內(nèi)暴露水平的重要指標(biāo)。世界衛(wèi)生組織（WHO）規(guī)定了各類人群的血鉛生物閾限值，兒童為100ug/L。目前國(guó)家未見(jiàn)推薦方法，1999年，衛(wèi)生部頒布了.標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS/T174-1999血鉛的酸脫蛋白──石墨爐原子吸收光譜法，我們參照此方法并改用10%（V/V）硝酸去除血中蛋白，再根據(jù)血樣粘稠進(jìn)樣時(shí)容易飛濺等特點(diǎn)，設(shè)置了石墨爐程序升溫，分兩步干燥，解決了血樣容易飛濺的難題。為評(píng)估方法的準(zhǔn)確性，進(jìn)行了忙樣分樣，結(jié)果滿意。樣品的回收率為86%-103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=4.19%。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 方法原理

  全血經(jīng)10%HNO₃容血和去血蛋白質(zhì)后，充分振蕩高速離心沉淀。取上清液用石墨爐原子吸收光譜測(cè)定鉛含量。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 AA-7001原子吸收儀，鉛空心吸收燈。

1.2.2血鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

  濃度分別為38ug/L、112ug/L、284.2ug/L、385.7ug/L,（中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)衛(wèi)所）。

1.2.3  1.5ml帶蓋聚乙烯離心管。

1.2.4  液體高速混合器，（太倉(cāng)市科教器材廠）。

1.2.5  高速臺(tái)式離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

1.2.6  10%（V/V）硝酸，取10mL高純硝酸用純水稀釋到100L。

1.2.7  25 、50 、1000ul可調(diào)微量加樣器。

1.2.8  儀器工作條件

    pb測(cè)定波長(zhǎng)283.3nm,燈電流3mA,光譜帶寬0.2nm，保護(hù)氣：氬氣。氘燈扣除背景。                    

1.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

    各取50uL鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液管內(nèi)壁呈環(huán)狀加入事先已裝有300uL10%HNO₃的1.5帶蓋聚乙烯管中，這時(shí)濃度被稀釋7倍，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為：0.0ug/L5.43ug/L16.0ug/L40.6ug/L55.1ug/L。立即置高速液體旋渦混合器混勻30/s,放置30min后以1000rpm速度離心10min，取上清液20ml進(jìn)樣，測(cè)定吸光值，繪制濃度──吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：y=3.394×10^-3X+0.0103 r=0.9992，線性范圍5ug/L-100ug/L                  

1.4  樣品測(cè)定                            

取50uL抗凝血同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作，然后取上清液20uL進(jìn)行石墨爐分析，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)濃渡，乘以稀釋倍數(shù)  即得血中鉛含量。        

2  結(jié)果與討論                    

2.1 升溫程序                        

由于樣品的粘度較大，干燥時(shí)容易飛濺，我們將其分為兩步干燥，并將第二部干燥時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，解決了容易飛濺。

表1石墨爐升溫程序     

程序 起始溫度（℃）終止溫度（℃） 時(shí)間（s）氣體

干燥 60             120        25      打開(kāi)

干燥120             130        20      打開(kāi)

灰化130             450        20      打開(kāi)

灰化450             450        10      打開(kāi)

灰化450             450         6      關(guān)閉

原子化2000          2000        4      關(guān)閉

清楚  2300           2300       3      打開(kāi)

2.2精密度和回收率實(shí)驗(yàn)

  取血樣重復(fù)測(cè)定6次，并添加標(biāo)樣測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)表2和表3

表2精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

血樣值（µg/L） 測(cè)定值（µg/L） S  RSD（%）

10.8         11.2     11.3    0.45   4.19

10.2         10.3     10.7  

表3 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

血樣本底 加標(biāo)量 測(cè)定次數(shù) 回收率 平均回收率 

（µg/L） （µg/L）  （n）      （%）     （%）

20.4      20     5     86.2-103.5  92.4

2.3盲樣的測(cè)定

  我們用此法測(cè)定了中國(guó)醫(yī)科院環(huán)衛(wèi)所提供的質(zhì)控樣，結(jié)果見(jiàn)表4和表5。兩組質(zhì)控樣經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其質(zhì)空評(píng)估值Q<[1]，表明整體操作存在誤差較小，測(cè)試結(jié)果合格。

表4 質(zhì)控實(shí)驗(yàn)結(jié)果

質(zhì)控樣代號(hào)  測(cè)試值（µg/L）  真值（µg/L）

   p1         116.4         118

   p2         148.5         147

   p3         318.2         314

   p4         182.2         191

   p5         80.8          87 

環(huán)衛(wèi)所提供

表5 質(zhì)控樣結(jié)果

質(zhì)控代號(hào)  測(cè)試值（µg/L）   真值（µg/L）

1              102.8       110

2              194.4          280

3               22.3            20

4               47.2          48

5              345.2         362

6              162.5         157

環(huán)衛(wèi)所提供

2.4  樣品的穩(wěn)定性

   通過(guò)實(shí)驗(yàn)，血羊經(jīng)處理后2h穩(wěn)定，因血液成分較為復(fù)雜，超過(guò)兩小時(shí)后，結(jié)果不穩(wěn)定，所以血樣處理后應(yīng)盡快測(cè)定。

小結(jié)

本文通過(guò)對(duì)去蛋白    石墨爐測(cè)定血鉛方法的探討摸索，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了改進(jìn)，證明本法具有快速準(zhǔn)確靈敏度高等特點(diǎn)，加之用血量少，手指血或耳垂即可，兒童易于接受，很適用于大面積測(cè)定兒童血鉛含量。

參考文獻(xiàn)

[1]

  徐伯慧，閻慧芳主編.<<工作場(chǎng)所有害物質(zhì)監(jiān)測(cè)方法>>，中國(guó)人民*出版社，2003：322-323

[2]

  牛映斗.全血中鉛的石墨爐原子吸收法分析，內(nèi)部資料，2002。

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